Bahan tanaman dan patogen
Populasi pemetaan asosiasi sorgum yang dikenal sebagai populasi konversi sorgum (SCP) disediakan oleh Dr. Pat Brown di Universitas Illinois (sekarang di UC Davis).Ini telah dijelaskan sebelumnya dan merupakan kumpulan beragam garis yang diubah menjadi ketidakpekaan fotoperiode dan perawakan lebih kecil untuk memfasilitasi pertumbuhan dan perkembangan tanaman di lingkungan AS.510 galur dari populasi ini digunakan dalam penelitian ini meskipun karena perkecambahan yang buruk dan masalah pengendalian kualitas lainnya, tidak semua galur digunakan dalam analisis ketiga sifat tersebut.Pada akhirnya data dari 345 galur digunakan untuk analisis respon kitin, 472 galur untuk respon flg22, dan 456 untuk resistensi TLS.B. memasakstrain LSLP18 diperoleh dari Dr. Burt Bluhm di Universitas Arkansas.
Pengukuran respon MAMP
Dua MAMP berbeda digunakan dalam penelitian ini flg22, (Katalog Genscript# RP19986), dan kitin.Tanaman sorgum ditanam dalam sisipan yang diletakkan di atas tanah datar yang diisi dengan tanah (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) di dalam rumah kaca.Tanaman disiram sehari sebelum pengambilan sampel untuk menghindari kelembapan daun berlebih pada hari pengumpulan.
Jalur-jalur tersebut diacak dan, untuk alasan logistik, ditanam dalam kelompok sebanyak 60 baris.Untuk setiap baris, ditanam tiga 'pot' dengan dua benih per baris.Batch berikutnya ditanam segera setelah batch sebelumnya diproses hingga seluruh populasi telah dinilai.Dua percobaan percobaan dilakukan untuk kedua MAMP dengan genotipe diacak ulang pada masing-masing dua percobaan.
Tes ROS dilakukan seperti yang dijelaskan sebelumnya.Ringkasnya, untuk setiap baris ditanam enam bibit dalam 3 pot berbeda.Dari bibit yang dihasilkan dipilih tiga bibit berdasarkan keseragaman.Bibit yang terlihat tidak biasa atau secara signifikan lebih tinggi atau lebih pendek dari kebanyakan bibit tidak digunakan.Empat cakram daun berdiameter 3 mm dipotong dari bagian terluas daun ke-4 dari tiga tanaman sorgum berumur 15 hari yang berbeda.Satu cakram per daun dari dua tanaman dan dua cakram dari satu tanaman, dengan cakram kedua menjadi pengatur air (lihat di bawah).Cakram tersebut diapungkan satu per satu pada 50 μl H20 dalam pelat 96 lubang hitam, ditutup dengan segel aluminium untuk menghindari paparan cahaya, dan disimpan pada suhu kamar semalaman.Keesokan paginya larutan reaksi dibuat menggunakan 2 mg/ml chemiluminescent probe L-012 (Wako, katalog #120-04891), 2 mg/ml horseradish peroxidase (Tipe VI-A, Sigma-Aldrich, katalog # P6782), dan 100 mg/ml Kitin atau 2 μM Flg22.50 μl larutan reaksi ini ditambahkan ke tiga dari empat sumur.Sumur keempat adalah kontrol tiruan, dimana larutan reaksi tidak termasuk MAMP ditambahkan.Empat sumur kosong yang hanya berisi air juga dimasukkan ke dalam setiap pelat.
Setelah menambahkan larutan reaksi, pendaran diukur menggunakan pembaca pelat mikro multi-deteksi SynergyTM 2 (BioTek) setiap 2 menit selama 1 jam.Pembaca pelat melakukan pengukuran pendaran setiap 2 menit selama 1 jam ini.Jumlah dari seluruh 31 pembacaan dihitung untuk memberikan nilai untuk setiap sumur.Nilai perkiraan respons MAMP untuk setiap genotipe dihitung sebagai (nilai pendaran rata-rata dari tiga sumur percobaan—nilai sumur tiruan) -dikurangi nilai rata-rata sumur kosong.Nilai sumur kosong selalu mendekati nol.
Cakram daunNicotiana benthamiana, satu galur sorgum dengan respons tinggi (SC0003), dan satu galur sorgum dengan respons rendah (PI 6069) juga dimasukkan sebagai kontrol di setiap pelat 96 sumur untuk tujuan pengendalian kualitas.
B. memasakpersiapan inokulum dan inokulasi
B. memasakinokulum disiapkan seperti dijelaskan sebelumnya.Secara singkat, butiran sorgum direndam dalam air selama tiga hari, dibilas, dimasukkan ke dalam labu berbentuk kerucut 1L dan diautoklaf selama satu jam pada suhu 15psi dan 121 °C.Biji-bijian tersebut kemudian diinokulasi dengan sekitar 5 ml miselia maserasi dari kultur segarB. memasakLSLP18 diisolasi dan dibiarkan selama 2 minggu pada suhu kamar, labu dikocok setiap 3 hari.Setelah 2 minggu, butiran sorgum yang terserang jamur dikeringkan di udara dan kemudian disimpan pada suhu 4 °C sampai inokulasi lapangan.Inokulum yang sama digunakan untuk keseluruhan percobaan dan dibuat segar setiap tahun.Untuk inokulasi, 6–10 butir yang terserang ditempatkan ke dalam lingkaran tanaman sorgum berumur 4–5 minggu.Spora yang dihasilkan dari jamur ini menyebabkan infeksi pada tanaman sorgum muda dalam waktu seminggu.
Persiapan benih
Sebelum ditanam di lapangan, benih sorgum diberi perlakuan dengan campuran fungisida, insektisida, dan safener yang mengandung ~1% fungisida Spirato 480 FS, 4% fungisida Sebring 480 FS, 3% fungisida Sorpro 940 ES seed safener.Kemudian benih dikering-anginkan selama 3 hari yang memberikan lapisan tipis campuran ini di sekitar benih.Pengaman mengizinkan penggunaan herbisida Dual Magnum sebagai pengobatan pra-munculnya.
Evaluasi resistensi Target Leaf Spot
SCP ditanam di Stasiun Penelitian Tanaman Pusat di Clayton, NC pada tanggal 14-15 Juni 2017 dan 20 Juni 2018 dalam rancangan acak kelompok lengkap dengan dua ulangan percobaan di setiap kasus.Percobaan ditanam dalam barisan tunggal sepanjang 1,8 m dengan lebar baris 0,9 m dengan menggunakan 10 benih per petak.Dua baris pembatas ditanam di sekeliling pinggiran setiap percobaan untuk mencegah efek tepi.Percobaan diinokulasi pada tanggal 20 Juli 2017 dan 20 Juli 2018 dimana tanaman sorgum berada pada tahap pertumbuhan 3. Penilaian dilakukan dengan skala satu sampai sembilan, dimana tanaman yang tidak menunjukkan tanda-tanda penyakit diberi skor sembilan dan lengkap. tanaman mati diberi skor satu.Dua pemeringkatan diambil pada tahun 2017 dan empat pembacaan pada tahun 2018 dimulai dua minggu setelah inokulasi setiap tahun.sAUDPC (area standar di bawah kurva perkembangan penyakit) dihitung seperti dijelaskan sebelumnya.
Waktu posting: 01 April-2021