Dalam proyek sebelumnya yang menguji pabrik pengolahan makanan lokal untuk nyamuk di Thailand, minyak esensial (EO) dari Cyperus rotundus, lengkuas, dan kayu manis ditemukan memiliki aktivitas anti-nyamuk yang baik terhadap Aedes aegypti. Dalam upaya untuk mengurangi penggunaan bahan makanan tradisionalinsektisidaUntuk meningkatkan pengendalian populasi nyamuk yang resisten, penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi potensi sinergisme antara efek pembunuh nyamuk dewasa dari etilen oksida dan toksisitas permetrin terhadap nyamuk Aedes aegypti, termasuk strain yang resisten dan sensitif terhadap piretroid.
Untuk mengevaluasi komposisi kimia dan aktivitas pembunuhan minyak atsiri (EO) yang diekstrak dari rimpang C. rotundus dan A. galanga serta kulit kayu C. verum terhadap strain rentan Muang Chiang Mai (MCM-S) dan strain resisten Pang Mai Dang (PMD-R). (Keterangan lebih lanjut tentang aktivitas nyamuk dewasa Aedes aegypti.) Bioassay campuran EO-permethrin juga dilakukan pada nyamuk Aedes ini untuk memahami aktivitas sinergisnya.
Karakterisasi kimia menggunakan metode analitik GC-MS menunjukkan bahwa 48 senyawa diidentifikasi dari minyak atsiri C. rotundus, A. galanga, dan C. verum, yang masing-masing menyumbang 80,22%, 86,75%, dan 97,24% dari total komponen. Cyperene (14,04%), β-bisabolene (18,27%), dan cinnamaldehyde (64,66%) adalah komponen utama minyak cyperus, minyak galangal, dan minyak balsamic, masing-masing. Dalam uji pembunuhan nyamuk dewasa secara biologis, EV C. rotundus, A. galanga, dan C. verum efektif dalam membunuh Ae. Nilai LD50 MCM-S dan PMD-R terhadap nyamuk Aedes aegypti masing-masing adalah 10,05 dan 9,57 μg/mg betina, 7,97 dan 7,94 μg/mg betina, dan 3,30 dan 3,22 μg/mg betina. Efisiensi MCM-S dan PMD-R dalam membunuh nyamuk Aedes aegypti dewasa dalam minyak esensial ini mendekati piperonil butoksida (nilai PBO, LD50 = 6,30 dan 4,79 μg/mg betina, masing-masing), tetapi tidak sekuat permetrin (nilai LD50 = 0,44 dan 3,70 ng/mg betina masing-masing). Namun, bioassay kombinasi menemukan sinergi antara minyak esensial dan permetrin. Sinergisme signifikan dengan permetrin terhadap dua strain nyamuk Aedes. Aedes aegypti tercatat dalam EM C. rotundus dan A. galanga. Penambahan minyak C. rotundus dan A. galanga secara signifikan menurunkan nilai LD50 permethrin pada MCM-S dari 0,44 menjadi 0,07 ng/mg dan 0,11 ng/mg pada betina, masing-masing, dengan nilai rasio sinergi (SR) masing-masing 6,28 dan 4,00. Selain itu, minyak esensial C. rotundus dan A. galanga juga secara signifikan menurunkan nilai LD50 permethrin pada PMD-R dari 3,70 menjadi 0,42 ng/mg dan 0,003 ng/mg pada betina, masing-masing, dengan nilai SR masing-masing 8,81 dan 1233,33.
Efek sinergis kombinasi EO-permethrin untuk meningkatkan toksisitas pada nyamuk dewasa terhadap dua strain nyamuk Aedes. Aedes aegypti menunjukkan peran yang menjanjikan dari etilen oksida sebagai sinergis dalam meningkatkan efektivitas anti-nyamuk, terutama di mana senyawa tradisional tidak efektif atau tidak sesuai.
Nyamuk Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) adalah vektor utama demam berdarah dan penyakit virus menular lainnya seperti demam kuning, chikungunya, dan virus Zika, yang menimbulkan ancaman besar dan terus-menerus bagi manusia [1, 2]. Virus dengue adalah demam berdarah patogen paling serius yang menyerang manusia, dengan perkiraan 5–100 juta kasus terjadi setiap tahun dan lebih dari 2,5 miliar orang di seluruh dunia berisiko [3]. Wabah penyakit menular ini memberikan beban besar pada populasi, sistem kesehatan, dan ekonomi sebagian besar negara tropis [1]. Menurut Kementerian Kesehatan Thailand, terdapat 142.925 kasus demam berdarah dan 141 kematian yang dilaporkan secara nasional pada tahun 2015, lebih dari tiga kali lipat jumlah kasus dan kematian pada tahun 2014 [4]. Terlepas dari bukti historis, demam berdarah telah diberantas atau sangat dikurangi oleh nyamuk Aedes. Setelah pengendalian Aedes aegypti [5], tingkat infeksi meningkat secara dramatis dan penyakit menyebar ke seluruh dunia, sebagian disebabkan oleh pemanasan global selama beberapa dekade. Eliminasi dan pengendalian Ae. Aedes aegypti relatif sulit karena merupakan vektor nyamuk domestik yang kawin, makan, beristirahat, dan bertelur di dalam dan sekitar tempat tinggal manusia pada siang hari. Selain itu, nyamuk ini memiliki kemampuan untuk beradaptasi dengan perubahan lingkungan atau gangguan yang disebabkan oleh peristiwa alam (seperti kekeringan) atau tindakan pengendalian manusia, dan dapat kembali ke jumlah semula [6, 7]. Karena vaksin terhadap demam berdarah baru-baru ini disetujui dan tidak ada pengobatan khusus untuk demam berdarah, pencegahan dan pengurangan risiko penularan demam berdarah sepenuhnya bergantung pada pengendalian vektor nyamuk dan penghapusan kontak manusia dengan vektor.
Secara khusus, penggunaan bahan kimia untuk pengendalian nyamuk kini memainkan peran penting dalam kesehatan masyarakat sebagai komponen penting dari manajemen vektor terpadu yang komprehensif. Metode kimia yang paling populer meliputi penggunaan insektisida rendah toksik yang bekerja melawan larva nyamuk (larvisida) dan nyamuk dewasa (adidocida). Pengendalian larva melalui pengurangan sumber dan penggunaan larvasida kimia secara teratur seperti organofosfat dan pengatur pertumbuhan serangga dianggap penting. Namun, dampak lingkungan yang merugikan yang terkait dengan pestisida sintetis dan pemeliharaannya yang intensif dan kompleks tetap menjadi perhatian utama [8, 9]. Pengendalian vektor aktif tradisional, seperti pengendalian nyamuk dewasa, tetap menjadi cara pengendalian yang paling efektif selama wabah virus karena dapat memberantas vektor penyakit menular dengan cepat dan dalam skala besar, serta mengurangi masa hidup dan umur panjang populasi vektor lokal [3, 10]. Empat kelas insektisida kimia: organoklorin (disebut hanya sebagai DDT), organofosfat, karbamat, dan piretroid membentuk dasar program pengendalian vektor, dengan piretroid dianggap sebagai kelas yang paling sukses. Insektisida ini sangat efektif melawan berbagai arthropoda dan memiliki toksisitas rendah terhadap mamalia. Saat ini, piretroid sintetis merupakan mayoritas pestisida komersial, yang mencakup sekitar 25% pasar pestisida global [11, 12]. Permetrin dan deltametrin adalah insektisida piretroid spektrum luas yang telah digunakan di seluruh dunia selama beberapa dekade untuk mengendalikan berbagai hama yang penting dalam bidang pertanian dan medis [13, 14]. Pada tahun 1950-an, DDT dipilih sebagai bahan kimia pilihan untuk program pengendalian nyamuk kesehatan masyarakat nasional Thailand. Menyusul meluasnya penggunaan DDT di daerah endemik malaria, Thailand secara bertahap menghentikan penggunaan DDT antara tahun 1995 dan 2000 dan menggantinya dengan dua piretroid: permetrin dan deltametrin [15, 16]. Insektisida piretroid ini diperkenalkan pada awal tahun 1990-an untuk mengendalikan malaria dan demam berdarah, terutama melalui perawatan kelambu dan penggunaan kabut termal serta semprotan dengan toksisitas sangat rendah [14, 17]. Namun, efektivitasnya menurun karena resistensi nyamuk yang kuat dan kurangnya kepatuhan masyarakat karena kekhawatiran tentang kesehatan masyarakat dan dampak lingkungan dari bahan kimia sintetis. Hal ini menimbulkan tantangan signifikan terhadap keberhasilan program pengendalian vektor ancaman [14, 18, 19]. Untuk membuat strategi lebih efektif, diperlukan tindakan penanggulangan yang tepat waktu dan sesuai. Prosedur pengelolaan yang direkomendasikan meliputi substitusi zat alami, rotasi bahan kimia dari kelas yang berbeda, penambahan sinergis, dan pencampuran bahan kimia atau aplikasi simultan bahan kimia dari kelas yang berbeda [14, 20, 21]. Oleh karena itu, ada kebutuhan mendesak untuk menemukan dan mengembangkan alternatif dan sinergis yang ramah lingkungan, nyaman, dan efektif, dan penelitian ini bertujuan untuk menjawab kebutuhan tersebut.
Insektisida yang berasal dari bahan alami, terutama yang berbasis komponen tumbuhan, telah menunjukkan potensi dalam evaluasi alternatif pengendalian nyamuk saat ini dan di masa mendatang [22, 23, 24]. Beberapa penelitian telah menunjukkan bahwa pengendalian vektor nyamuk penting dimungkinkan dengan menggunakan produk tumbuhan, terutama minyak esensial (EO), sebagai pembunuh nyamuk dewasa. Sifat pembunuh nyamuk dewasa terhadap beberapa spesies nyamuk penting telah ditemukan pada banyak minyak nabati seperti seledri, jintan, zedoaria, adas, lada pipa, timi, Schinus terebinthifolia, Cymbopogon citratus, Cymbopogon schoenanthus, Cymbopogon giganteus, Chenopodium ambrosioides, Cochlospermum planchonii, Eucalyptus ter eticornis, Eucalyptus citriodora, Cananga odorata dan Petroselinum Criscum [25,26,27,28,29,30]. Etilen oksida kini digunakan tidak hanya sendiri, tetapi juga dalam kombinasi dengan zat tumbuhan yang diekstrak atau pestisida sintetis yang ada, menghasilkan berbagai tingkat toksisitas. Kombinasi insektisida tradisional seperti organofosfat, karbamat, dan piretroid dengan etilen oksida/ekstrak tumbuhan bertindak secara sinergis atau antagonis dalam efek toksiknya dan telah terbukti efektif melawan vektor penyakit dan hama [31,32,33,34,35]. Namun, sebagian besar penelitian tentang efek toksik sinergis dari kombinasi fitokimia dengan atau tanpa bahan kimia sintetis telah dilakukan pada vektor serangga pertanian dan hama daripada pada nyamuk yang penting secara medis. Selain itu, sebagian besar penelitian tentang efek sinergis dari kombinasi insektisida tumbuhan-sintetis terhadap vektor nyamuk telah berfokus pada efek larvasida.
Dalam penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh penulis sebagai bagian dari proyek penelitian berkelanjutan yang meneliti intimisida dari tanaman pangan asli di Thailand, etilen oksida dari Cyperus rotundus, lengkuas, dan kayu manis ditemukan memiliki potensi aktivitas terhadap nyamuk dewasa Aedes aegypti [36]. Oleh karena itu, penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi efektivitas minyak atsiri yang diisolasi dari tanaman obat ini terhadap nyamuk Aedes aegypti, termasuk strain yang resisten dan sensitif terhadap piretroid. Efek sinergis dari campuran biner etilen oksida dan piretroid sintetik dengan efikasi yang baik pada nyamuk dewasa juga telah dianalisis untuk mengurangi penggunaan insektisida tradisional dan meningkatkan resistensi terhadap vektor nyamuk, terutama terhadap Aedes aegypti. Artikel ini melaporkan karakterisasi kimia minyak atsiri yang efektif dan potensinya untuk meningkatkan toksisitas permetrin sintetik terhadap nyamuk Aedes aegypti pada strain yang sensitif terhadap piretroid (MCM-S) dan strain yang resisten (PMD-R).
Rimpang C. rotundus dan A. galanga serta kulit kayu C. verum (Gambar 1) yang digunakan untuk ekstraksi minyak atsiri dibeli dari pemasok obat herbal di Provinsi Chiang Mai, Thailand. Identifikasi ilmiah tanaman ini dilakukan melalui konsultasi dengan Bapak James Franklin Maxwell, Ahli Botani Herbarium, Departemen Biologi, Fakultas Sains, Universitas Chiang Mai (CMU), Provinsi Chiang Mai, Thailand, dan ilmuwan Wannari Charoensap; di Departemen Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Carnegie Mellon, Ibu. Spesimen voucher dari setiap tanaman disimpan di Departemen Parasitologi di Fakultas Kedokteran Universitas Carnegie Mellon untuk penggunaan di masa mendatang.
Sampel tanaman dikeringkan di tempat teduh satu per satu selama 3–5 hari di ruang terbuka dengan ventilasi aktif dan suhu sekitar 30 ± 5 °C untuk menghilangkan kadar air sebelum ekstraksi minyak atsiri alami (EO). Sebanyak 250 g dari setiap bahan tanaman kering digiling secara mekanis menjadi bubuk kasar dan digunakan untuk mengisolasi minyak atsiri (EO) dengan distilasi uap. Peralatan distilasi terdiri dari mantel pemanas listrik, labu bulat 3000 mL, kolom ekstraksi, kondensor, dan perangkat Cool Ace (Eyela Cool Ace CA-1112 CE, Tokyo Rikakikai Co. Ltd., Tokyo, Jepang). Tambahkan 1600 ml air suling dan 10-15 butir kaca ke dalam labu, lalu panaskan hingga sekitar 100°C menggunakan pemanas listrik selama minimal 3 jam hingga distilasi selesai dan tidak ada lagi EO yang dihasilkan. Lapisan EO dipisahkan dari fase air menggunakan corong pemisah, dikeringkan di atas natrium sulfat anhidrat (Na2SO4) dan disimpan dalam botol cokelat tertutup rapat pada suhu 4°C hingga komposisi kimia dan aktivitas serangga dewasa diperiksa.
Komposisi kimia minyak atsiri dilakukan secara bersamaan dengan uji hayati untuk zat dewasa. Analisis kualitatif dilakukan menggunakan sistem GC-MS yang terdiri dari kromatograf gas Hewlett-Packard (Wilmington, CA, USA) 7890A yang dilengkapi dengan detektor selektif massa kuadrupol tunggal (Agilent Technologies, Wilmington, CA, USA) dan MSD 5975C (EI). (Agilent Technologies).
Kolom kromatografi – DB-5MS (30 m × ID 0,25 mm × ketebalan lapisan 0,25 µm). Total waktu analisis GC-MS adalah 20 menit. Kondisi analisis adalah suhu injektor dan saluran transfer masing-masing 250 dan 280 °C; suhu tungku diatur untuk meningkat dari 50°C hingga 250°C dengan laju 10°C/menit, gas pembawa adalah helium; laju alir 1,0 ml/menit; volume injeksi adalah 0,2 µL (1/10% volume dalam CH2Cl2, rasio split 100:1); Sistem ionisasi elektron dengan energi ionisasi 70 eV digunakan untuk deteksi GC-MS. Rentang akuisisi adalah 50–550 satuan massa atom (amu) dan kecepatan pemindaian adalah 2,91 pemindaian per detik. Persentase relatif komponen dinyatakan sebagai persentase yang dinormalisasi berdasarkan luas puncak. Identifikasi bahan EO didasarkan pada indeks retensi (RI). RI dihitung menggunakan persamaan Van den Dool dan Kratz [37] untuk seri n-alkana (C8-C40) dan dibandingkan dengan indeks retensi dari literatur [38] dan basis data pustaka (NIST 2008 dan Wiley 8NO8). Identitas senyawa yang ditunjukkan, seperti struktur dan rumus molekul, dikonfirmasi dengan perbandingan dengan sampel otentik yang tersedia.
Standar analitik untuk permetrin sintetis dan piperonil butoksida (PBO, kontrol positif dalam studi sinergi) dibeli dari Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, AS). Kit pengujian dewasa Organisasi Kesehatan Dunia (WHO) dan dosis diagnostik kertas yang diresapi permetrin (0,75%) dibeli secara komersial dari Pusat Pengendalian Vektor WHO di Penang, Malaysia. Semua bahan kimia dan reagen lain yang digunakan adalah kelas analitik dan dibeli dari lembaga lokal di Provinsi Chiang Mai, Thailand.
Nyamuk yang digunakan sebagai organisme uji dalam bioassay dewasa adalah nyamuk Aedes aegypti laboratorium yang kawin bebas, termasuk strain Muang Chiang Mai (MCM-S) yang rentan dan strain Pang Mai Dang (PMD-R) yang resisten. Strain MCM-S diperoleh dari sampel lokal yang dikumpulkan di daerah Muang Chiang Mai, Provinsi Chiang Mai, Thailand, dan telah dipelihara di ruang entomologi Departemen Parasitologi, Fakultas Kedokteran CMU, sejak tahun 1995 [39]. Strain PMD-R, yang ditemukan resisten terhadap permethrin, diisolasi dari nyamuk lapangan yang awalnya dikumpulkan dari Ban Pang Mai Dang, Distrik Mae Tang, Provinsi Chiang Mai, Thailand, dan telah dipelihara di lembaga yang sama sejak tahun 1997 [40]. Strain PMD-R ditumbuhkan di bawah tekanan selektif untuk mempertahankan tingkat resistensi dengan paparan intermiten terhadap 0,75% permethrin menggunakan kit deteksi WHO dengan beberapa modifikasi [41]. Setiap strain Ae. Nyamuk Aedes aegypti dikolonisasi secara individual di laboratorium bebas patogen pada suhu 25 ± 2 °C dan kelembaban relatif 80 ± 10% serta siklus terang/gelap 14:10 jam. Sekitar 200 larva disimpan dalam nampan plastik (panjang 33 cm, lebar 28 cm, dan tinggi 9 cm) yang diisi dengan air keran dengan kepadatan 150–200 larva per nampan dan diberi makan dua kali sehari dengan biskuit anjing steril. Cacing dewasa disimpan dalam kandang lembap dan terus menerus diberi makan dengan larutan sukrosa 10% dan larutan sirup multivitamin 10%. Nyamuk betina secara teratur menghisap darah untuk bertelur. Nyamuk betina berusia dua hingga lima hari yang belum menghisap darah dapat digunakan secara terus menerus dalam uji biologi nyamuk dewasa eksperimental.
Bioassay respons dosis-mortalitas EO dilakukan pada nyamuk Aedes aegypti betina dewasa, MCM-S dan PMD-R menggunakan metode topikal yang dimodifikasi sesuai dengan protokol standar WHO untuk pengujian kerentanan [42]. EO dari setiap tanaman diencerkan secara serial dengan pelarut yang sesuai (misalnya etanol atau aseton) untuk mendapatkan serangkaian konsentrasi bertingkat 4-6. Setelah dibius dengan karbon dioksida (CO2), nyamuk ditimbang satu per satu. Nyamuk yang telah dibius kemudian dibiarkan diam di atas kertas saring kering pada pelat dingin khusus di bawah mikroskop stereo untuk mencegah reaktivasi selama prosedur. Untuk setiap perlakuan, 0,1 μl larutan EO diaplikasikan ke pronotum atas nyamuk betina menggunakan mikrodispenser genggam Hamilton (700 Series Microliter™, Hamilton Company, Reno, NV, USA). Dua puluh lima nyamuk betina diberi perlakuan dengan setiap konsentrasi, dengan mortalitas berkisar antara 10% hingga 95% untuk setidaknya 4 konsentrasi berbeda. Nyamuk yang diberi perlakuan pelarut digunakan sebagai kontrol. Untuk mencegah kontaminasi sampel uji, ganti kertas saring dengan kertas saring baru untuk setiap EO yang diuji. Dosis yang digunakan dalam bioassay ini dinyatakan dalam mikrogram EO per miligram berat badan nyamuk betina hidup. Aktivitas PBO dewasa juga dinilai dengan cara yang serupa dengan EO, dengan PBO digunakan sebagai kontrol positif dalam percobaan sinergis. Nyamuk yang diberi perlakuan di semua kelompok ditempatkan dalam cangkir plastik dan diberi sirup sukrosa 10% ditambah sirup multivitamin 10%. Semua bioassay dilakukan pada suhu 25 ± 2 °C dan kelembaban relatif 80 ± 10% dan diulang empat kali dengan kontrol. Mortalitas selama periode pemeliharaan 24 jam diperiksa dan dikonfirmasi oleh kurangnya respons nyamuk terhadap rangsangan mekanis dan kemudian dicatat berdasarkan rata-rata dari empat replikasi. Perlakuan eksperimental diulang empat kali untuk setiap sampel uji menggunakan kelompok nyamuk yang berbeda. Hasilnya dirangkum dan digunakan untuk menghitung persentase angka kematian, yang kemudian digunakan untuk menentukan dosis letal 24 jam dengan analisis probit.
Efek antisidal sinergis EO dan permethrin dinilai menggunakan prosedur uji toksisitas lokal [42] seperti yang dijelaskan sebelumnya. Gunakan aseton atau etanol sebagai pelarut untuk menyiapkan permethrin pada konsentrasi yang diinginkan, serta campuran biner EO dan permethrin (EO-permethrin: permethrin dicampur dengan EO pada konsentrasi LD25). Kit uji (permethrin dan EO-permethrin) dievaluasi terhadap strain MCM-S dan PMD-R dari Ae. Aedes aegypti. Masing-masing dari 25 nyamuk betina diberi empat dosis permethrin untuk menguji efektivitasnya dalam membunuh nyamuk dewasa, dengan setiap perlakuan diulang empat kali. Untuk mengidentifikasi kandidat sinergis EO, 4 hingga 6 dosis EO-permethrin diberikan kepada masing-masing dari 25 nyamuk betina, dengan setiap aplikasi diulang empat kali. Perlakuan PBO-permethrin (permethrin dicampur dengan konsentrasi LD25 PBO) juga berfungsi sebagai kontrol positif. Dosis yang digunakan dalam bioassay ini dinyatakan dalam nanogram sampel uji per miligram berat badan nyamuk betina hidup. Empat evaluasi eksperimental untuk setiap strain nyamuk dilakukan pada kelompok yang dibiakkan secara individual, dan data mortalitas dikumpulkan dan dianalisis menggunakan Probit untuk menentukan dosis letal 24 jam.
Tingkat mortalitas disesuaikan menggunakan rumus Abbott [43]. Data yang disesuaikan dianalisis dengan analisis regresi Probit menggunakan program statistik komputer SPSS (versi 19.0). Nilai letal 25%, 50%, 90%, 95% dan 99% (LD25, LD50, LD90, LD95 dan LD99, masing-masing) dihitung menggunakan interval kepercayaan 95% (95% CI) yang sesuai. Pengukuran signifikansi dan perbedaan antar sampel uji dinilai menggunakan uji chi-square atau uji Mann-Whitney U dalam setiap pengujian biologis. Hasil dianggap signifikan secara statistik pada P < 0,05.< 0,05. Koefisien resistensi (RR) diperkirakan pada tingkat LD50 menggunakan rumus berikut [12]:
RR > 1 menunjukkan resistensi, dan RR ≤ 1 menunjukkan sensitivitas. Nilai rasio sinergi (SR) dari setiap kandidat sinergis dihitung sebagai berikut [34, 35, 44]:
Faktor ini membagi hasil menjadi tiga kategori: nilai SR 1±0,05 dianggap tidak memiliki efek yang nyata, nilai SR >1,05 dianggap memiliki efek sinergis, dan nilai SR >1,05 dianggap memiliki efek sinergis. Minyak cair berwarna kuning muda dapat diperoleh dengan distilasi uap rimpang C. rotundus dan A. galanga serta kulit kayu C. verum. Hasil yang dihitung berdasarkan berat kering adalah 0,15%, 0,27% (w/w), dan 0,54% (v/v). Studi GC-MS komposisi kimia minyak C. rotundus, A. galanga dan C. verum menunjukkan adanya 19, 17 dan 21 senyawa, yang masing-masing menyumbang 80,22%, 86,75% dan 97,24% dari semua komponen (Tabel 2). Senyawa minyak rimpang C. lucidum terutama terdiri dari cyperonene (14,04%), diikuti oleh carralene (9,57%), α-capsellan (7,97%), dan α-capsellan (7,53%). Komponen kimia utama minyak rimpang lengkuas adalah β-bisabolene (18,27%), diikuti oleh α-bergamotene (16,28%), 1,8-cineole (10,17%) dan piperonol (10,09%). Sementara cinnamaldehyde (64,66%) diidentifikasi sebagai komponen utama minyak kulit kayu C. verum, cinnamic acetate (6,61%), α-copaene (5,83%) dan 3-phenylpropionaldehyde (4,09%) dianggap sebagai bahan minor. Struktur kimia cyperne, β-bisabolene dan cinnamaldehyde adalah senyawa utama dari C. rotundus, A. galanga dan C. verum, masing-masing, seperti yang ditunjukkan pada Gambar 2.
Hasil dari tiga minyak atsiri (EO) yang menilai aktivitas nyamuk Aedes aegypti dewasa ditunjukkan pada Tabel 3. Semua EO ditemukan memiliki efek mematikan pada nyamuk Aedes aegypti MCM-S pada berbagai jenis dan dosis. EO yang paling efektif adalah C. verum, diikuti oleh A. galanga dan C. rotundus dengan nilai LD50 masing-masing 3,30, 7,97 dan 10,05 μg/mg pada nyamuk betina MCM-S, sedikit lebih tinggi daripada 3,22 (U = 1), Z = -0,775, P = 0,667), 7,94 (U = 2, Z = 0, P = 1) dan 9,57 (U = 0, Z = -1,549, P = 0,333) μg/mg pada nyamuk betina. Hal ini sesuai dengan PBO yang memiliki efek pada nyamuk dewasa yang sedikit lebih tinggi terhadap PMD-R dibandingkan strain MSM-S, dengan nilai LD50 masing-masing sebesar 4,79 dan 6,30 μg/mg betina (U = 0, Z = -2,021, P = 0,057). Dapat dihitung bahwa nilai LD50 C. verum, A. galanga, C. rotundus dan PBO terhadap PMD-R masing-masing sekitar 0,98, 0,99, 0,95 dan 0,76 kali lebih rendah daripada nilai LD50 terhadap MCM-S. Dengan demikian, ini menunjukkan bahwa kerentanan terhadap PBO dan EO relatif serupa antara kedua strain Aedes. Meskipun PMD-R lebih rentan daripada MCM-S, sensitivitas Aedes aegypti tidak signifikan. Sebaliknya, kedua strain Aedes sangat berbeda dalam sensitivitasnya terhadap permethrin. aegypti (Tabel 4). PMD-R menunjukkan resistensi yang signifikan terhadap permethrin (nilai LD50 = 0,44 ng/mg pada wanita) dengan nilai LD50 yang lebih tinggi yaitu 3,70 dibandingkan dengan MCM-S (nilai LD50 = 0,44 ng/mg pada wanita) ng/mg pada wanita (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029). Meskipun PMD-R jauh kurang sensitif terhadap permethrin daripada MCM-S, sensitivitasnya terhadap PBO dan minyak C. verum, A. galanga, dan C. rotundus sedikit lebih tinggi daripada MCM-S.
Sebagaimana diamati dalam bioassay populasi dewasa dari kombinasi EO-permethrin, campuran biner permethrin dan EO (LD25) menunjukkan sinergi (nilai SR > 1,05) atau tidak ada efek (nilai SR = 1 ± 0,05). Efek kompleks campuran EO-permethrin pada nyamuk albino eksperimental. Strain Aedes aegypti MCM-S dan PMD-R ditunjukkan pada Tabel 4 dan Gambar 3. Penambahan minyak C. verum ditemukan sedikit mengurangi LD50 permethrin terhadap MCM-S dan sedikit meningkatkan LD50 terhadap PMD-R menjadi 0,44–0,42 ng/mg pada nyamuk betina dan dari 3,70 menjadi 3,85 ng/mg pada nyamuk betina, masing-masing. Sebaliknya, penambahan minyak C. rotundus dan A. galanga secara signifikan mengurangi LD50 permethrin pada MCM-S dari 0,44 menjadi 0,07 (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) dan menjadi 0,11 (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) ng/mg pada wanita. Berdasarkan nilai LD50 MCM-S, nilai SR campuran EO-permethrin setelah penambahan minyak C. rotundus dan A. galanga masing-masing adalah 6,28 dan 4,00. Oleh karena itu, LD50 permethrin terhadap PMD-R menurun secara signifikan dari 3,70 menjadi 0,42 (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) dan menjadi 0,003 dengan penambahan minyak C. rotundus dan A. galanga (U = 0, Z = -2,337, P = 0,029) ng/mg betina. Nilai SR permethrin yang dikombinasikan dengan C. rotundus terhadap PMD-R adalah 8,81, sedangkan nilai SR campuran galangal-permethrin adalah 1233,33. Dibandingkan dengan MCM-S, nilai LD50 kontrol positif PBO menurun dari 0,44 menjadi 0,26 ng/mg (betina) dan dari 3,70 ng/mg (betina) menjadi 0,65 ng/mg (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) dan PMD-R (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029). Nilai SR campuran PBO-permethrin untuk strain MCM-S dan PMD-R masing-masing adalah 1,69 dan 5,69. Hasil ini menunjukkan bahwa minyak C. rotundus dan A. galanga serta PBO meningkatkan toksisitas permethrin lebih besar daripada minyak C. verum untuk strain MCM-S dan PMD-R.
Aktivitas dewasa (LD50) EO, PBO, permethrin (PE) dan kombinasinya terhadap strain nyamuk Aedes yang sensitif terhadap piretroid (MCM-S) dan resisten terhadap piretroid (PMD-R). Aedes aegypti
[45]. Piretroid sintetis digunakan di seluruh dunia untuk mengendalikan hampir semua arthropoda yang penting dalam bidang pertanian dan medis. Namun, karena konsekuensi berbahaya dari penggunaan insektisida sintetis, terutama dalam hal perkembangan dan resistensi nyamuk yang meluas, serta dampaknya terhadap kesehatan jangka panjang dan lingkungan, kini ada kebutuhan mendesak untuk mengurangi penggunaan insektisida sintetis tradisional dan mengembangkan alternatif [35, 46, 47]. Selain melindungi lingkungan dan kesehatan manusia, keunggulan insektisida botani meliputi selektivitas tinggi, ketersediaan global, dan kemudahan produksi dan penggunaan, sehingga menjadikannya lebih menarik untuk pengendalian nyamuk [32, 48, 49]. Studi ini, selain menjelaskan karakteristik kimia minyak esensial yang efektif melalui analisis GC-MS, juga menilai potensi minyak esensial dewasa dan kemampuannya untuk meningkatkan toksisitas permethrin sintetis pada Aedes aegypti pada strain sensitif piretroid (MCM-S) dan strain resisten (PMD-R).
Karakterisasi GC-MS menunjukkan bahwa cypern (14,04%), β-bisabolene (18,27%), dan cinnamaldehyde (64,66%) adalah komponen utama dari minyak C. rotundus, A. galanga, dan C. verum, masing-masing. Senyawa-senyawa ini telah menunjukkan beragam aktivitas biologis. Ahn dkk. [50] melaporkan bahwa 6-acetoxycyperene, yang diisolasi dari rimpang C. rotundus, bertindak sebagai senyawa antitumor dan dapat menginduksi apoptosis yang bergantung pada kaspase pada sel kanker ovarium. β-Bisabolene, yang diekstrak dari minyak atsiri pohon mur, menunjukkan sitotoksisitas spesifik terhadap sel tumor payudara manusia dan tikus baik in vitro maupun in vivo [51]. Cinnamaldehyde, yang diperoleh dari ekstrak alami atau disintesis di laboratorium, telah dilaporkan memiliki aktivitas insektisida, antibakteri, antijamur, antiinflamasi, imunomodulator, antikanker, dan antiangiogenik [52].
Hasil uji bioassay aktivitas dewasa yang bergantung pada dosis menunjukkan potensi yang baik dari EO yang diuji dan menunjukkan bahwa strain nyamuk Aedes MCM-S dan PMD-R memiliki kerentanan yang serupa terhadap EO dan PBO. Perbandingan efektivitas EO dan permethrin menunjukkan bahwa yang terakhir memiliki efek alergen yang lebih kuat: nilai LD50 masing-masing adalah 0,44 dan 3,70 ng/mg pada nyamuk betina untuk strain MCM-S dan PMD-R. Temuan ini didukung oleh banyak penelitian yang menunjukkan bahwa pestisida alami, terutama produk yang berasal dari tumbuhan, umumnya kurang efektif dibandingkan zat sintetis [31, 34, 35, 53, 54]. Hal ini mungkin karena yang pertama merupakan kombinasi kompleks dari bahan aktif atau tidak aktif, sedangkan yang terakhir merupakan senyawa aktif tunggal yang dimurnikan. Namun, keragaman dan kompleksitas bahan aktif alami dengan mekanisme kerja yang berbeda dapat meningkatkan aktivitas biologis atau menghambat perkembangan resistensi pada populasi inang [55, 56, 57]. Banyak peneliti telah melaporkan potensi anti-nyamuk dari C. verum, A. galanga dan C. rotundus dan komponennya seperti β-bisabolene, cinnamaldehyde dan 1,8-cineole [22, 36, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64]. Namun, tinjauan literatur mengungkapkan bahwa belum ada laporan sebelumnya tentang efek sinergisnya dengan permethrin atau insektisida sintetis lainnya terhadap nyamuk Aedes aegypti.
Dalam penelitian ini, perbedaan signifikan dalam kerentanan permethrin diamati antara dua strain Aedes. Aedes aegypti. MCM-S sensitif terhadap permethrin, sedangkan PMD-R jauh kurang sensitif terhadapnya, dengan tingkat resistensi 8,41. Dibandingkan dengan sensitivitas MCM-S, PMD-R kurang sensitif terhadap permethrin tetapi lebih sensitif terhadap EO, memberikan dasar untuk penelitian lebih lanjut yang bertujuan untuk meningkatkan efektivitas permethrin dengan menggabungkannya dengan EO. Bioassay berbasis kombinasi sinergis untuk efek pada nyamuk dewasa menunjukkan bahwa campuran biner EO dan permethrin mengurangi atau meningkatkan mortalitas nyamuk dewasa Aedes. Aedes aegypti. Penambahan minyak C. verum sedikit menurunkan LD50 permethrin terhadap MCM-S tetapi sedikit meningkatkan LD50 terhadap PMD-R dengan nilai SR masing-masing 1,05 dan 0,96. Hal ini menunjukkan bahwa minyak C. verum tidak memiliki efek sinergis atau antagonis terhadap permethrin ketika diuji pada MCM-S dan PMD-R. Sebaliknya, minyak C. rotundus dan A. galanga menunjukkan efek sinergis yang signifikan dengan secara signifikan mengurangi nilai LD50 permethrin pada MCM-S atau PMD-R. Ketika permethrin dikombinasikan dengan EO dari C. rotundus dan A. galanga, nilai SR campuran EO-permethrin untuk MCM-S masing-masing adalah 6,28 dan 4,00. Selain itu, ketika permethrin dievaluasi terhadap PMD-R dalam kombinasi dengan C. rotundus (SR = 8,81) atau A. galanga (SR = 1233,33), nilai SR meningkat secara signifikan. Perlu dicatat bahwa baik C. rotundus maupun A. galanga secara signifikan meningkatkan toksisitas permethrin terhadap Ae. aegypti PMD-R. Demikian pula, PBO ditemukan meningkatkan toksisitas permethrin dengan nilai SR masing-masing 1,69 dan 5,69 untuk strain MCM-S dan PMD-R. Karena C. rotundus dan A. galanga memiliki nilai SR tertinggi, keduanya dianggap sebagai sinergis terbaik dalam meningkatkan toksisitas permethrin pada MCM-S dan PMD-R.
Beberapa penelitian sebelumnya telah melaporkan efek sinergis dari kombinasi insektisida sintetis dan ekstrak tumbuhan terhadap berbagai spesies nyamuk. Bioassay larvasida terhadap Anopheles Stephensi yang dipelajari oleh Kalayanasundaram dan Das [65] menunjukkan bahwa fenthion, organofosfat spektrum luas, berasosiasi dengan Cleodendron inerme, Pedalium murax dan Parthenium hysterophorus. Sinergi yang signifikan diamati antara ekstrak dengan efek sinergis (SF) masing-masing sebesar 1,31, 1,38, 1,40, 1,48, 1,61 dan 2,23. Dalam skrining larvasida terhadap 15 spesies mangrove, ekstrak petroleum eter dari akar bakau ditemukan paling efektif terhadap Culex quinquefasciatus dengan nilai LC50 sebesar 25,7 mg/L [66]. Efek sinergis ekstrak ini dan insektisida botani piretrum juga dilaporkan mengurangi LC50 piretrum terhadap larva C. quinquefasciatus dari 0,132 mg/L menjadi 0,107 mg/L, selain itu, perhitungan SF sebesar 1,23 digunakan dalam penelitian ini. 34,35,44]. Efektivitas gabungan ekstrak akar Solanum citron dan beberapa insektisida sintetis (misalnya, fenthion, cypermethrin (piretroid sintetis) dan timethphos (larvasida organofosfor)) terhadap nyamuk Anopheles dievaluasi. Stephensi [54] dan C. quinquefasciatus [34]. Penggunaan gabungan cypermethrin dan ekstrak petroleum eter buah kuning menunjukkan efek sinergis pada cypermethrin di semua rasio. Rasio yang paling efektif adalah kombinasi biner 1:1 dengan nilai LC50 dan SF masing-masing sebesar 0,0054 ppm dan 6,83, relatif terhadap An. Stephen West[54]. Sementara campuran biner 1:1 dari S. xanthocarpum dan temephos bersifat antagonis (SF = 0,6406), kombinasi S. xanthocarpum-fenthion (1:1) menunjukkan aktivitas sinergis terhadap C. quinquefasciatus dengan SF sebesar 1,3125 [ 34]]. Tong dan Blomquist [35] mempelajari efek etilen oksida tumbuhan terhadap toksisitas karbaril (karbamat spektrum luas) dan permetrin terhadap nyamuk Aedes. Aedes aegypti. Hasil penelitian menunjukkan bahwa etilen oksida dari agar, lada hitam, juniper, helichrysum, cendana, dan wijen meningkatkan toksisitas karbaril terhadap nyamuk Aedes. Nilai SR larva Aedes aegypti bervariasi dari 1,0 hingga 7,0. Sebaliknya, tidak satu pun dari minyak esensial (EO) yang bersifat toksik terhadap nyamuk Aedes dewasa. Pada tahap ini, belum ada efek sinergis yang dilaporkan untuk kombinasi Aedes aegypti dan EO-karbaril. PBO digunakan sebagai kontrol positif untuk meningkatkan toksisitas karbaril terhadap nyamuk Aedes. Nilai SR larva dan nyamuk dewasa Aedes aegypti masing-masing adalah 4,9-9,5 dan 2,3. Hanya campuran biner permetrin dan EO atau PBO yang diuji untuk aktivitas larvasida. Campuran EO-permetrin memiliki efek antagonis, sedangkan campuran PBO-permetrin memiliki efek sinergis terhadap larva nyamuk Aedes aegypti. Namun, percobaan respons dosis dan evaluasi SR untuk campuran PBO-permetrin belum dilakukan. Meskipun hanya sedikit hasil yang telah dicapai mengenai efek sinergis dari kombinasi fitosintetik terhadap vektor nyamuk, data ini mendukung hasil yang ada, yang membuka prospek penambahan sinergis tidak hanya untuk mengurangi dosis yang diberikan, tetapi juga untuk meningkatkan efek pembunuhan serangga. Selain itu, hasil penelitian ini menunjukkan untuk pertama kalinya bahwa minyak C. rotundus dan A. galanga secara sinergis memberikan efikasi yang jauh lebih tinggi terhadap strain nyamuk Aedes yang rentan dan resisten terhadap piretroid dibandingkan dengan PBO ketika dikombinasikan dengan toksisitas permethrin pada Aedes aegypti. Namun, hasil yang tidak terduga dari analisis sinergis menunjukkan bahwa minyak C. verum memiliki aktivitas anti-dewasa terbesar terhadap kedua strain Aedes. Anehnya, efek toksik permethrin pada Aedes aegypti tidak memuaskan. Variasi dalam efek toksik dan efek sinergis mungkin sebagian disebabkan oleh paparan berbagai jenis dan tingkat komponen bioaktif dalam minyak ini.
Meskipun upaya telah dilakukan untuk memahami cara meningkatkan efisiensi, mekanisme sinergisnya masih belum jelas. Kemungkinan alasan perbedaan efikasi dan potensi sinergis dapat mencakup perbedaan komposisi kimia produk yang diuji dan perbedaan kerentanan nyamuk yang terkait dengan status dan perkembangan resistensi. Terdapat perbedaan antara komponen etilen oksida utama dan minor yang diuji dalam penelitian ini, dan beberapa senyawa ini telah terbukti memiliki efek penolak dan toksik terhadap berbagai hama dan vektor penyakit [61,62,64,67,68]. Namun, senyawa utama yang dikarakterisasi dalam minyak C. rotundus, A. galanga, dan C. verum, seperti cypern, β-bisabolene, dan cinnamaldehyde, tidak diuji dalam makalah ini untuk aktivitas anti-dewasa dan sinergisnya terhadap Ae. aedes aegypti. Oleh karena itu, penelitian lebih lanjut diperlukan untuk mengisolasi bahan aktif yang terdapat dalam setiap minyak esensial dan menjelaskan efikasi insektisida dan interaksi sinergisnya terhadap vektor nyamuk ini. Secara umum, aktivitas insektisida bergantung pada aksi dan reaksi antara racun dan jaringan serangga, yang dapat disederhanakan dan dibagi menjadi tiga tahap: penetrasi ke dalam kulit tubuh serangga dan membran organ target, aktivasi (= interaksi dengan target) dan detoksifikasi zat beracun [57, 69]. Oleh karena itu, sinergisme insektisida yang menghasilkan peningkatan efektivitas kombinasi toksikan membutuhkan setidaknya salah satu dari kategori ini, seperti peningkatan penetrasi, aktivasi senyawa terakumulasi yang lebih besar, atau pengurangan detoksifikasi bahan aktif pestisida. Misalnya, toleransi energi menunda penetrasi kutikula melalui kutikula yang menebal dan resistensi biokimia, seperti peningkatan metabolisme insektisida yang diamati pada beberapa strain serangga resisten [70, 71]. Efektivitas EO yang signifikan dalam meningkatkan toksisitas permethrin, terutama terhadap PMD-R, dapat menunjukkan solusi untuk masalah resistensi insektisida dengan berinteraksi dengan mekanisme resistensi [57, 69, 70, 71]. Tong dan Blomquist [35] mendukung hasil penelitian ini dengan menunjukkan adanya interaksi sinergis antara EO dan pestisida sintetis. aegypti, terdapat bukti aktivitas penghambatan terhadap enzim detoksifikasi, termasuk sitokrom P450 monooxygenase dan karboksil esterase, yang terkait erat dengan perkembangan resistensi terhadap pestisida tradisional. PBO tidak hanya dikatakan sebagai penghambat metabolisme sitokrom P450 monooxygenase tetapi juga meningkatkan penetrasi insektisida, seperti yang ditunjukkan oleh penggunaannya sebagai kontrol positif dalam penelitian sinergis [35, 72]. Menariknya, 1,8-cineole, salah satu komponen penting yang ditemukan dalam minyak lengkuas, dikenal karena efek toksiknya pada spesies serangga [22, 63, 73] dan telah dilaporkan memiliki efek sinergis di beberapa bidang penelitian aktivitas biologis [74, 75, 76, 77]. Selain itu, 1,8-cineole dalam kombinasi dengan berbagai obat termasuk kurkumin [78], 5-fluorouracil [79], asam mefenamat [80] dan zidovudin [81] juga memiliki efek peningkat permeasi in vitro. Dengan demikian, kemungkinan peran 1,8-cineole dalam aksi insektisida sinergis tidak hanya sebagai bahan aktif tetapi juga sebagai peningkat penetrasi. Karena sinergisme yang lebih besar dengan permethrin, terutama terhadap PMD-R, efek sinergis minyak lengkuas dan minyak trichosanthes yang diamati dalam penelitian ini mungkin dihasilkan dari interaksi dengan mekanisme resistensi, yaitu peningkatan permeabilitas terhadap klorin. Piretroid meningkatkan aktivasi senyawa yang terakumulasi dan menghambat enzim detoksifikasi seperti sitokrom P450 monooxygenase dan karboksil esterase. Namun, aspek-aspek ini memerlukan penelitian lebih lanjut untuk menjelaskan peran spesifik EO dan senyawa terisolasi (sendiri atau dalam kombinasi) dalam mekanisme sinergis.
Pada tahun 1977, peningkatan tingkat resistensi permethrin dilaporkan pada populasi vektor utama di Thailand, dan selama beberapa dekade berikutnya, penggunaan permethrin sebagian besar digantikan oleh bahan kimia piretroid lainnya, terutama yang menggantikan deltamethrin [82]. Namun, resistensi vektor terhadap deltamethrin dan kelas insektisida lainnya sangat umum di seluruh negeri karena penggunaan yang berlebihan dan terus-menerus [14, 17, 83, 84, 85, 86]. Untuk mengatasi masalah ini, disarankan untuk merotasi atau menggunakan kembali pestisida yang dibuang yang sebelumnya efektif dan kurang beracun bagi mamalia, seperti permethrin. Saat ini, meskipun penggunaan permethrin telah dikurangi dalam program pengendalian nyamuk pemerintah nasional baru-baru ini, resistensi permethrin masih dapat ditemukan pada populasi nyamuk. Hal ini mungkin disebabkan oleh paparan nyamuk terhadap produk pengendalian hama rumah tangga komersial, yang sebagian besar terdiri dari permethrin dan piretroid lainnya [14, 17]. Dengan demikian, penggunaan kembali permethrin yang sukses membutuhkan pengembangan dan implementasi strategi untuk mengurangi resistensi vektor. Meskipun tidak satu pun dari minyak esensial yang diuji secara individual dalam penelitian ini seefektif permethrin, bekerja bersama dengan permethrin menghasilkan efek sinergis yang mengesankan. Ini merupakan indikasi yang menjanjikan bahwa interaksi EO dengan mekanisme resistensi menghasilkan kombinasi permethrin dengan EO yang lebih efektif daripada insektisida atau EO saja, khususnya terhadap Ae. Aedes aegypti yang resisten terhadap PMD. Manfaat campuran sinergis dalam meningkatkan efikasi, meskipun menggunakan dosis yang lebih rendah untuk pengendalian vektor, dapat mengarah pada peningkatan manajemen resistensi dan pengurangan biaya [33, 87]. Dari hasil ini, sangat menggembirakan untuk mencatat bahwa EO A. galanga dan C. rotundus secara signifikan lebih efektif daripada PBO dalam mensinergikan toksisitas permethrin pada strain MCM-S dan PMD-R dan merupakan alternatif potensial untuk bantuan ergogenik tradisional.
Minyak atsiri (EO) yang dipilih memiliki efek sinergis yang signifikan dalam meningkatkan toksisitas pada nyamuk dewasa terhadap Ae. aegypti yang resisten terhadap PMD, terutama minyak lengkuas, yang memiliki nilai SR hingga 1233,33, menunjukkan bahwa EO memiliki potensi luas sebagai sinergis dalam meningkatkan efektivitas permethrin. Hal ini dapat mendorong penggunaan produk alami aktif baru, yang bersama-sama dapat meningkatkan penggunaan produk pengendalian nyamuk yang sangat efektif. Ini juga mengungkapkan potensi etilen oksida sebagai sinergis alternatif untuk secara efektif meningkatkan insektisida lama atau tradisional untuk mengatasi masalah resistensi yang ada pada populasi nyamuk. Menggunakan tanaman yang mudah didapat dalam program pengendalian nyamuk tidak hanya mengurangi ketergantungan pada bahan impor dan mahal, tetapi juga mendorong upaya lokal untuk memperkuat sistem kesehatan masyarakat.
Hasil ini jelas menunjukkan efek sinergis signifikan yang dihasilkan oleh kombinasi etilen oksida dan permetrin. Hasil ini menyoroti potensi etilen oksida sebagai sinergis tanaman dalam pengendalian nyamuk, meningkatkan efektivitas permetrin terhadap nyamuk, terutama pada populasi yang resisten. Pengembangan dan penelitian di masa mendatang akan membutuhkan bioanalisis sinergis minyak lengkuas dan alpinia serta senyawa terisolasi darinya, kombinasi insektisida asal alami atau sintetis terhadap berbagai spesies dan tahap nyamuk, dan pengujian toksisitas terhadap organisme non-target. Penggunaan praktis etilen oksida sebagai sinergis alternatif yang layak.
Organisasi Kesehatan Dunia. Strategi global untuk pencegahan dan pengendalian demam berdarah 2012–2020. Jenewa: Organisasi Kesehatan Dunia, 2012.
Weaver SC, Costa F., Garcia-Blanco MA, Ko AI, Ribeiro GS, Saade G., dkk. Virus Zika: sejarah, kemunculan, biologi dan prospek pengendalian. Penelitian antivirus. 2016;130:69–80.
Organisasi Kesehatan Dunia. Lembar Fakta Demam Dengue. 2016. http://www.searo.who.int/entity/vector_borne_tropical_diseases/data/data_factsheet/en/. Tanggal akses: 20 Januari 2017
Departemen Kesehatan Masyarakat. Status terkini kasus demam berdarah dengue dan demam berdarah dengue di Thailand. 2016. http://www.m-society.go.th/article_attach/13996/17856.pdf. Tanggal akses: 6 Januari 2017
Ooi EE, Goh CT, Gabler DJ. 35 tahun pencegahan demam berdarah dan pengendalian vektor di Singapura. Penyakit menular mendadak. 2006;12:887–93.
Morrison AC, Zielinski-Gutierrez E, Scott TW, Rosenberg R. Mengidentifikasi tantangan dan mengusulkan solusi untuk mengendalikan vektor virus Aedes aegypti. PLOS Medicine. 2008;5:362–6.
Pusat Pengendalian dan Pencegahan Penyakit. Demam Dengue, entomologi dan ekologi. 2016. http://www.cdc.gov/dengue/entomologyecology/. Tanggal akses: 6 Januari 2017
Ohimain EI, Angaye TKN, Bassey SE Perbandingan aktivitas larvasida daun, kulit kayu, batang dan akar Jatropa curcas (Euphorbiaceae) terhadap vektor malaria Anopheles gambiae. SZhBR. 2014;3:29-32.
Soleimani-Ahmadi M, Watandoust H, Zareh M. Karakteristik habitat larva Anopheles di daerah malaria program pemberantasan malaria di Iran tenggara. Asia Pacific J Trop Biomed. 2014;4(Suppl 1):S73–80.
Bellini R, Zeller H, Van Bortel W. Tinjauan pendekatan pengendalian vektor, pencegahan dan pengendalian wabah virus West Nile, dan tantangan yang dihadapi Eropa. Parasites vector. 2014;7:323.
Muthusamy R., Shivakumar MS. Seleksi dan mekanisme molekuler resistensi sipermetrin pada ulat merah (Amsacta albistriga Walker). Fisiologi biokimia hama. 2014;117:54–61.
Ramkumar G., Shivakumar MS. Studi laboratorium tentang resistensi permethrin dan resistensi silang Culex quinquefasciatus terhadap insektisida lain. Pusat Penelitian Palastor. 2015;114:2553–60.
Matsunaka S, Hutson DH, Murphy SD. Kimia Pestisida: Kesejahteraan Manusia dan Lingkungan, Vol. 3: Mekanisme kerja, metabolisme dan toksikologi. New York: Pergamon Press, 1983.
Chareonviriyaphap T, Bangs MJ, Souvonkert V, Kongmi M, Korbel AV, Ngoen-Klan R. Tinjauan resistensi insektisida dan penghindaran perilaku vektor penyakit manusia di Thailand. Parasites vector. 2013;6:280.
Chareonviriyaphap T, Aum-Aung B, Ratanatham S. Pola resistensi insektisida saat ini di antara vektor nyamuk di Thailand. Southeast Asia J Trop Med Public Health. 1999;30:184-94.
Chareonviriyaphap T, Bangs MJ, Ratanatham S. Status malaria di Thailand. Southeast Asia J Trop Med Public Health. 2000;31:225–37.
Plernsub S, Saingamsuk J, Yanola J, Lumjuan N, Thippavankosol P, Walton S, Somboon P. Frekuensi temporal mutasi resistensi knockdown F1534C dan V1016G pada nyamuk Aedes aegypti di Chiang Mai, Thailand, dan dampak mutasi terhadap efisiensi penyemprotan kabut termal yang mengandung piretroid. Aktatrop. 2016;162:125–32.
Vontas J, Kioulos E, Pavlidi N, Moru E, Della Torre A, Ranson H. Resistensi insektisida pada vektor utama demam berdarah Aedes albopictus dan Aedes aegypti. Fisiologi biokimia hama. 2012;104:126–31.
Waktu posting: 08 Juli 2024